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不同型號非接觸式DNA打斷儀的實驗對比效果

實驗目的:將全基因組DNA樣品進行200-500bp區(qū)間的均一性片段化處理。
  
實驗儀器及材料:
  
1.實驗儀器:本次實驗選用三款非接觸打斷儀器如下:小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀、bioruptor-非接觸式超聲破碎儀、小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀。
  
2.實驗材料:核酸濃度為160 ng/μL的全基因組DNA溶液。
  
實驗步驟:
  
1.提前15分鐘將三款儀器的冷水機啟動,設置溫度為4℃。
  
2.將每個愛思進品牌的1.5 mL EP管加入100 μL 濃度為160 ng/μL的全基因組DNA溶液。

3.將2管裝好樣品的1.5 mL EP 管分別放入三款儀器的適配器當中,其他空余的孔位由加同樣體積水的1.5 mL EP 管補齊。
  
4.程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長15分鐘和20分鐘,二個梯度對比。
  
5.程序結束后,取出樣品使用毛細管電泳進行基因組片段化檢測。
  
實驗結果:
  
1.小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀
  
①程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長15分鐘

平均片段大?。?10.0 bp

片段范圍 bp占比 %
25-1004
100-20021.3
200-50064.7
500-90410

②程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔10s,總時長20分鐘
  
平均片段大?。?00.1 bp

片段范圍 bp占比 %
25-1004.2
100-20022.7
200-50064.3
500-9048.8

2.bioruptor-非接觸式超聲破碎儀

①程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長15分鐘

平均片段大?。?32.9 bp

片段范圍 bp占比 %
24-1001.4
100-2007.8
200-50058.3
500-89132.5

②程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長20分鐘

平均片段大?。?05.8 bp

片段范圍 bp占比 %
24-1001.5
100-2009.5
200-50063.2
500-90425.8

3.小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀

①程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長15分鐘

平均片段大小:365.5 bp

片段范圍 bp占比 %
24-1002.1
100-20013.6
200-50065.4
500-90418.9

②程序設置:溫度4℃,超聲工作時間20s 間隔時間10s,總時長20分鐘

平均片段大?。?88.1 bp

片段范圍 bp占比 %
24-1001.9
100-20012.3
200-50062.2
500-90423.6

4.三款儀器實驗結果匯總

總時長15分鐘
200-500 bp區(qū)間占比
總時長20分鐘
200-500 bp區(qū)間占比
峰圖趨勢
小美超聲-高通量聲波基因組剪切儀64.7%64.3%平緩
bioruptor-非接觸式超聲破碎儀58.3%63.2%陡坡
小美超聲-聚能式超聲波DNA打斷儀65.4%62.2%陡坡

注:當基因組片段在200-500 bp區(qū)間占比越高,峰圖越平緩狀時,說明基因組片段的均一性更好,反之亦然。

在樣品、程序設定等條件相同的情況下,bioruptor的非接觸式超聲破碎儀和小美超聲的聚能式超聲波DNA打斷儀在200-500 bp區(qū)間占比分別達到58.3%和65.4%,且二者峰圖呈陡坡狀,表明基因組片段化均一性差。

小美超聲的高通量聲波基因組剪切儀在200-500 bp區(qū)間占比達到64.7%,峰圖呈平緩狀,表明基因組片段均一性更好。

非接觸超聲波DNA打斷儀|一站式DNA打斷解決方案
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